麗珠集團卵泡

『壹』 常用促排卵葯物，進口促排卵葯有哪幾種，進口促排卵葯

2007年用葯前三甲分別為75IU注射用重組人促卵泡激素，75IU注射用尿促性素和100IU0.5ML重組人促卵泡激素β注射液. 瑞士雪蘭諾和荷蘭歐加農公司分別獨攬重組人促卵泡激素和重組促卵泡激素β市場，兩個產品促卵泡生成素純度超過99%，作用穩定，因此具有很大優勢。本土企業由於技術與經費限制主要集中力量爭奪尿促性素市場，麗珠集團制葯廠和上海第一生化葯業產品分別於1993年和1992年獲准上市，資歷都較長，但珠海麗珠憑借其高純度尿提促卵泡激素使產品品質有所提升，在國內同類產品中脫穎而出，雖然價格大大高於其他國內產品，但仍低於進口產品，因此搶去進口產品的部分市場份額並實現了對尿促性素市場的統領。

『貳』 促排卵葯物有哪些常見的有哪幾種

2007年用葯前三甲分別為75IU注射用重組人促卵泡激素，75IU注射用尿促性素和100IU0.5ML重組人促卵泡激素β注射液. 瑞士雪蘭諾和荷蘭歐加農公司分別獨攬重組人促卵泡激素和重組促卵泡激素β市場，兩個產品促卵泡生成素純度超過99%，作用穩定，因此具有很大優勢。本土企業由於技術與經費限制主要集中力量爭奪尿促性素市場，麗珠集團制葯廠和上海第一生化葯業產品分別於1993年和1992年獲准上市，資歷都較長，但珠海麗珠憑借其高純度尿提促卵泡激素使產品品質有所提升，在國內同類產品中脫穎而出，雖然價格大大高於其他國內產品，但仍低於進口產品，因此搶去進口產品的部分市場份額並實現了對尿促性素市場的統領。

『叄』 大家都是進口促排葯嗎

我那會用的進口的,福特蒙.一天一千多.取卵時沒有空泡，泡泡長得比較均勻.移植的鮮胚一次成功,好孕雙胎,現在四個月了。祝姐妹一切順利!

『肆』 一張思維導圖，看遍醫葯細分行業

看完了以銀行、券商和保險為代表的大金融行業之後，我們接下來學習大消費行業中最重要的代表之一醫葯行業。

隨著我國人口老齡化程度的不斷加深，醫葯行業的未來發展有著堅實的群眾基礎。如果翻看醫葯行業的上市公司，可以發現在過去的十年中牛股輩出，出現了很多十倍股，給長期投資者以豐厚的回報。就沖這一點，就值得我們好好花上些時間，來學習一下如何投資醫葯行業。

有趣的是，除了高度的專業性之外，醫葯行業雖然被稱為行業，其實它並不是一個業務和財務邏輯一致的行業，而是由完全不同邏輯的多個細分行業所組成的大集合。所以，我們「零基礎學醫葯」這個系列的第一篇，就先來仔細梳理一下，醫葯行業到底有多少個細分子行業，並對它們一一加以簡要介紹。

醫葯行業的細分，首先從醫葯分家開始。

說到醫療，大家首先會想到醫院。醫院是什麼地方呢？是醫生給病人看病的地方。醫生做什麼呢？為患者提供醫療服務。所以，從醫的角度來講，醫葯行業的第一個細分子行業就是 醫療服務 。

在A股的上市公司中，代表性的醫療服務企業是愛爾眼科。愛爾眼科是專業眼科連鎖醫療機構，截至2019年，已在中國大陸30個省市區建立270餘家專業眼科醫院，覆蓋全國醫保人口超過70%，年門診量超過650 萬人。並且，在美國、歐洲和香港開設有80餘家眼科醫院。

從事 健康 體檢業務的美年 健康 ，是醫療服務領域另一家代表性的企業。美年 健康 是一家以 健康 體檢為核心，集 健康 咨詢、 健康 評估、 健康 干預於一體的專業體檢和醫療服務集團。公司總部位於上海，深耕布局北京、深圳、沈陽、廣州、成都、武漢、西安、天津、重慶、杭州等200餘個核心城市，布局400餘家醫療及體檢中心，專業服務團隊擁有全職專家、醫護及管理團隊40000餘人。2017年已為2000萬人次提供專業 健康 服務，2018年體檢人次預計將突破3000萬大關，是醫療和大 健康 板塊中市值和影響力傑出的上市公司。

此外，一些上市公司參控股民營醫院，這部分業務也屬於醫療服務。代表性的有復星醫葯投資的禪城醫院，2018年初，禪城醫院高分通過國際醫院JCI認證，成為全國首家通過第六版JCI標準的三甲綜合醫院。

醫療服務行業，是一個非常好的行業，因為人總要生病，生病就需要去醫院看病，由醫生來提供醫療服務；而 健康 的人，也需要定期體檢，來及早發現潛在隱患。這些都是剛性需求，幾乎不受經濟周期波動的影響。從供給的角度來看，專業的醫生需要長期的學習與實踐才能養成，其能提供的服務數量總體有限，因而醫療服務行業的價格長期來看都是不斷增長的，能夠有效戰勝通脹。

說完了醫，我們再來看看葯。

我們這里的醫葯製造，是一個廣義的概念，包括了醫葯的研發、生產和製造。首先，醫葯企業需要通過研發，來發現和創造一個新的葯物，這就是創新葯的概念，側重點在研發。其次，一個新的葯物通過醫葯企業研發出來，並通過了國家食葯監局的審批之後，就可以大規模生產製造，准備上市了，這個環節的關鍵點在於生產。所以，廣義的醫葯製造，其關鍵切分點就在於是否需要做創新葯的研發。

創新葯

如果一家葯企，主要的精力放在研發上，以發現新的葯物為主，那這家企業就是 創新葯 企業。國際上，著名的醫葯企業都是創新葯企業，比如輝瑞（Pfizer）、諾華（Novartis）、羅氏（Roche）、默克（Merck）、賽諾菲（Sanofi）、強生（Johnson & Johnson）、吉利德（Gilead Sciences）、葛蘭素史克（GlaxoSmithKline）、艾伯維（AbbVie）、安進（Amgen）等。

在A股市場上，最著名的代表性創新葯企就是恆瑞醫葯，也是目前市值最高的醫葯企業，最新市值高達2500億元。恆瑞醫葯是一家從事醫葯創新和高品質葯品研發、生產及推廣的醫葯 健康 企業。截至2018年底，共有全球員工20000餘人，是國內知名的抗腫瘤葯、手術用葯和造影劑的供應商，也是國家抗腫瘤葯技術創新產學研聯盟牽頭單位，建有國家靶向葯物工程技術研究中心、博士後科研工作站。

創新葯企業，都有著高比例的研發投入。以恆瑞醫葯為例，公司 每年投入銷售額10％以上 的研發資金，在美國、歐洲、日本和中國多地建有研發中心或分支機構。截至2018年底，公司的研發團隊已有3000多人，其中包括2000多名博士、碩士及100多名海歸人士。公司累計申請國內發明專利655項，擁有國內有效授權發明專利147項，歐美日等國外授權專利226項，專有核心技術獲得國家 科技 進步二等獎2項，中國專利金獎1項。

仿製葯

如果一家葯企，主要的精力不是放在原創性的研發上，而是對於那些專利保護到期的葯品進行仿製生產，那麼這家企業就是 仿製葯 企業。

仿製葯的意義在於，其不需要高昂的研發投入，也不需要重復進行創新葯批准之前所必須的多年臨床前動物研究和人體臨床研究，因而其生產成本要顯著低於創新葯。為了確保仿製葯可以治病，仿製葯需要與被仿葯具有相同的活性成分、劑型、給葯途徑和治療作用，即需要證明和原創葯具有相同的生物等效性。

在我們國家，食葯監局通過 一致性評價 ，來監管仿製葯的療效。只有那些通過仿製葯一致性評價的葯企，才能夠銷售該仿製葯，並參與醫保葯品的競標。所以， 通過一致性評價的仿製葯數量 ，通常是考察一家仿製葯企的研發實力的量化指標。

在A股市場上，代表性的仿製葯企業有華東醫葯。公司主要從事抗生素、中成葯、化學合成葯、基因工程葯品的生產銷售，以及中西葯、中葯材、醫療器械等的批零經銷業務，是一家集醫葯研發、制葯工業、葯品分銷、零售、醫葯物流為一體的大型綜合性醫葯上市公司。華東醫葯主要通過子公司中美華東來完成仿製葯的生產，其2017年銷售額超60億元，是國內器官移植和糖尿病葯物研發和生產領域領導企業。華東醫葯，是一家很有特點的企業，這從它的企業經營戰略口號中可以窺見一斑：「 不求品種很多，但求產品最大；要麼唯一，要麼第一；不一定要做火車頭，但一定要乘上第一節車廂 」。

除了以是否做原創性葯品研發來分類之外，醫葯製造企業還可以按照葯物的屬性分為：

其中，化學葯企還可以進一步細分為：

下面，我們分別介紹按照葯物屬性分類的各類葯企。

原料葯

原料葯的英文簡稱為API（Active Pharmaceutical Ingredient），其是指用於葯品製造中的任何一種物質或物質的混合物，而且在用於制葯時，成為葯品的一種活性成分。

具體來說，原料葯企業又分為兩個大類：

在A股市場中，代表性的大宗原料葯企業是中小企業板第一股（002001）新和成。公司是一家主要從事營養品、香精香料、高分子新材料和原料葯的生產和銷售的國家級高新技術企業。公司是世界四大維生素生產企業之一、全國大型的香精香料生產企業和維生素類飼料添加劑企業。

特色原料葯的代表性企業是華海葯業。公司是中國首家通過美國FDA制劑質量認證並自主擁有ANDA文號的制葯公司，也是首家在美國實現規模化制劑銷售的中國制葯公司。公司現有員工6500多人，在全球擁有40多家分子公司（包括美國、日本、德國、俄羅斯、西班牙、印度等）；主要業務覆蓋化學葯、生物葯、醫葯包裝、貿易流通等多個領域，與全球500多家制葯企業建立了長期合作關系，為近200個國家和地區提供醫療 健康 產品，是全球主要的心血管、精神類 健康 醫療產品製造商之一。

大宗原料葯，由於其類似大宗商品，使得其生產企業具有典型的 周期屬性 。從投資的角度來看，比較像化工企業，行業低谷（低PB高PE）的時候買入，行業高峰（高PB低PE）的時候賣出。

特色原料葯，主要是給下游的制劑企業、成品葯企做配套，從而有著類似「 蘋果產業鏈 」的特點。從投資的角度來看，主要看這家企業的下遊客戶是誰，如果前十大客戶都是國際上著名的制葯企業，那這家公司的實力就是不錯的；如果前十大客戶都是較少的制葯企業，可能在投資上就需要謹慎一些。

化學制劑

葯物制劑，通俗來說，就是將原料葯和其他輔料（比如醫用膠囊）加工成成品葯物。在化學制劑這個領域，大部分葯企都是仿製葯企業。

在A股中，化學制劑企業還是比較多的，除了上文「仿製葯」一節提到的華東醫葯之外，代表性的上市公司還有麗珠集團、信立泰、恩華葯業等。

從投資的角度來看，主要考慮以下幾點：

中成葯

中成葯是我們國家的一個特色，有著 歷史 悠久的傳統中醫作為廣泛的群眾基礎。按照是否需要醫生開處方，中成葯可以分為：

在A股市場中，代表性的中成葯企業雲南白葯、同仁堂、東阿阿膠、片仔癀、天士力等。此外，中葯飲片的代表性企業是康美葯業。

生物葯

生物葯物是指運用生物學、醫學、生物化學等的研究成果，綜合利用物理學、化學、生物化學、生物技術和葯學等學科的原理和方法，利用生物體、生物組織、細胞、體液等製造的一類用於預防、治療和診斷的製品。

通俗來說，生物葯企業就是基於生物體來製造葯物的企業。生物葯有著眾多的細分品類，包括：

在A股市場中，代表性的血製品企業是華蘭生物。公司是一家從事血液製品、疫苗、基因工程產品研發、生產和銷售的國家高新技術企業。也是我國血液製品行業中血漿綜合利用率最高，品種最多、規格最全的企業之一。

代表性的疫苗企業有智飛生物、沃森生物和康泰生物，當然還包括疫苗事件的主角長生生物。其中，智飛生物是國內綜合實力最強的上市民營生物疫苗供應和服務商之一。

代表性的重組蛋白葯物企業是長春高新，主要的產品是重組人生長激素（輔助生長）和注射用重組人促卵泡激素（輔助生殖）。此外，還有生產重組人胰島素的通化東寶，該公司使得中國成為繼美國、丹麥之後的第三個能生產重組人胰島素的國家。

代表性的單抗企業有復星醫葯旗下的復宏漢霖、信達生物制葯、齊魯制葯等。

看完了醫葯製造之後，我們再來看看醫葯行業裡面的另一個大的細分領域：醫療器械。與葯品類似，醫療器械也是五花八門。

首先，我們來看看 制葯裝備 ，這是每一家葯企所必需的。代表性的A股上市公司有東富龍和楚天 科技 。東富龍是一家為全球制葯企業提供製葯工藝、核心裝備、系統工程整體解決方案的綜合性制葯裝備服務商，是國內最大的凍干機設備製造商。楚天 科技 主營業務為水劑類制葯裝備的研發、設計、生產、銷售和服務，是我國替代進口制葯裝備產品的代表企業。

制葯裝備，類似於基建領域的挖掘機，代表了下游葯企GMP車間改造的需求，因而局部明顯的 行業周期性 。當下游GMP改造需求大幅增長的時候，上游制葯裝備企業的訂單就會放量增長，帶來營業收入和凈利潤的明顯增長；當下游GMP改造需求減弱時，訂單就會大幅減少，營收和凈利潤就會顯著下滑。

其次，我們來看看 高端醫療器械 ，比如常見的冠脈支架以及骨科的醫療器械。這些品種，往往單價都很高，終端價格甚至過萬元，出廠價差不多是終端價格的三折（三零扣），體現了產品的高單價、高毛利特點。與此同時，三類醫療器械從開始進入臨床，到最後獲批可能需要五年甚至更長的時間，研發投入不菲，研發周期也較長，這一點和 創新葯 類似。

在A股中，代表性的高端醫療器械公司是樂普醫療，公司是國內領先的心血管病植介入診療器械與設備的高端醫療產品產業集團，擁有國家 科技 部授予的國家唯一的國家心臟病植介入診療器械及裝備工程技術研究中心，是國內高端醫療器械領域能夠與國外產品形成強有力競爭的少數企業。樂普醫療的核心產品就是心臟支架，其產品研發也經過多次迭代，從最早的Partner系列，到Nano系列，再到正在申報的完全可降解的NeoVas系列，不斷進行產品的研發升級。

最後，我們來看看醫療器械領域的大眾消費品： 家用醫療器械 。常見的家用醫療器械包括血壓計、制氧機、呼吸機、血糖儀、輪椅、拐杖等，這些產品和 非處方葯 類似，偏消費屬性，通常在葯店購買。

在A股中，代表性的家用醫療器械公司是魚躍醫療。魚躍醫療是一家以提供家用醫療器械、醫用臨床器械和互聯網醫療服務為主要業務的公司，產品主要集中在呼吸供氧、康復護理、醫療急救、手術器械、中醫器械、護理類耗材、葯用貼膏及高分子衛生輔料及提供醫院消毒感染控制解決方案等領域。公司已成為了國內醫療器械行業領先企業，是國內最大的康復護理和醫用供氧系列醫械廠商。

與葯品相比，醫療器械領域的天花板要低很多。在葯品中，一個大的單品可以有幾十億甚至超過一百億的年銷售額，而醫療器械很難找到這樣的單品。同時，在一個子領域取得成功的產品，通常不能將其成功經驗復制到另一個子領域。這兩個特點，使得醫療器械領域主要依靠外延式並購來擴大企業規模，這一點在國內最大的醫療器械上市企業邁瑞醫療的發展壯大過程中得到了充分的體現。

邁瑞醫療是中國最大、全球領先的醫療器械及解決方案供應商，產品覆蓋生命信息與支持、體外診斷、醫學影像三大主要領域。公司在中國超過 30 個省市自治區設有分公司，境外擁有 39 家子公司。全球員工近萬人，其中研發人員佔比超過 20%，外籍員工超過 10%，來自全球 30 多個國家及地區，形成了龐大的全球研發、營銷和服務網路。

最後，我們再來看看醫葯商業。醫葯商業主要有兩種業態（商業模式）：

國資背景企業在醫葯商業市場占絕對主導地位，全國排名前三的醫葯商業企業均為國資背景，分別是國葯控股（港股）、華潤醫葯（港股）和上海醫葯（A股）。一些地方性醫葯商業企業龍頭同樣有國資背景，如南京醫葯、華東醫葯、重慶醫葯、柳州醫葯、人民同泰等。

在A股種，醫葯零售的代表性企業是益豐葯房。公司是國內領先的葯品零售連鎖企業之一，主要從事葯品、保健品、醫療器械以及與 健康 相關的日用便利品等的連鎖零售業務。截止2018年6月30日，公司在湖南、湖北、上海、江蘇、浙江、江西、廣東七省共開設了2,499家連鎖門店，向顧客銷售葯品、醫療器械、保健品、 健康 食品、個人護理用品及與 健康 相關的日用便利品等商品。

從投資角度來看，醫葯零售主要是連鎖葯店模式，行業的發展主要依靠兩個要素：一個是連鎖葯店的門店數量，通過自營、加盟以及並購的方式進行擴張；另一個是單店的經營效率，通過坪效、人均利潤等指標考量。此外，隨著處方葯的逐步外流，考慮到處方葯是一個萬億級別的大市場，而零售葯目前還在三四千億的水平，未來醫葯零售行業還有比較大的處方外流的空間。

由於醫葯行業的多元性，我們在這一篇中對其進行系統性梳理，將細分行業主要歸結為四個方面，分別是醫療服務（醫）、醫葯製造（葯）、醫療器械（器械）和醫葯商業（流通）。

所有這些，我們通過如下的思維導圖加以概括，方便讀者閱讀。

『伍』 大家都是進口促排葯嗎

我那會用的進口的,福特蒙.一天一千多.取卵時沒有空泡，泡泡長得比較均勻.移植的鮮胚一次成功,好孕雙胎,現在四個月了。祝姐妹一切順利!

『陸』 卵巢卵泡發育的分離方法對移植卵巢卵泡發育的影響實驗

目的
評估機械法、酶解法和酶解?機械結合法等分離方法對小鼠移植卵巢分離卵泡的發育及其生殖潛能的影響，建立更好的卵泡分離技術方案。
方法B6D2F1新生小鼠卵巢移植後分別用機械法、長時酶解法、短時酶解法或酶解?機械結合法分離卵巢組織中的腔前卵泡，分離回收卵泡在體外培養12 d時加入絨毛膜促性腺激素(hCG)處理26 h，收獲卵丘復合體進行體外受精。
結果機械法的卵泡回收量、卵泡培養殘存率、排卵率均高於酶解法，短時酶解法的排卵率高於長時酶解法;酶解機械結合法的平均卵泡回收量、平均排卵數、卵母細胞成熟率等多項指標均高於其他各組。
結論酶解機械結合法是分離小鼠卵泡良好的技術方案。
卵巢 卵泡 卵母細胞 培養技術 胚胎組織移植
人工誘導胚胎卵巢原始卵泡發育成熟可為受精機制研究和醫療性克隆提供充足的卵母細胞源。對異體移植發育到一定程度的卵巢進行生長卵泡分離是人工誘導卵泡發育的關鍵步驟之一[1?3]，迄今已經發展出兩種卵泡分離技術，包括酶解分離法和機械分離法。這兩種方法各有其缺點，使每個卵巢的卵泡回收率和成熟率均停留於較低水平。本研究探討了酶解法、機械法和酶解?機械結合法等分離方法對小鼠移植卵巢分離卵泡的發育及其生殖潛能的影響，以期建立更好的卵泡分離技術方案。 1.1 動物 C57BL/6(B6)雌鼠、DBA/2(D2)雄鼠購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司[合格證：SCXK(滬)2007?005]，以B6雌鼠和D2雄鼠交配繁殖B6D2F1(F1)小鼠。小鼠飼養於恆溫(25 ℃)動物房單籠獨立通風系統(IVC?II型，蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司)，光照14 h，黑暗10 h，自由飲水取食。
1.2 試劑 α?MEM?HEPES(42360?032)，α?MEM(32571?036)，膠原酶I(17100017)，脫氧核糖核酸酶(DNaseI，18047?019)及ITS(胰島素?轉鐵蛋白?硒混合物)均為美國Gibco公司產品; rFSH(注射用重組人促卵泡激素，瑞士Serono公司);LH(黃體生成素，美國Sigma公司);hCG(中國麗珠集團麗珠制葯廠);FCS(胎牛血清)，penicillin/streptomycin(青黴素/鏈黴素)及KSOM+AA(MR?106?D)均為美國Chemicon公司產品。
1.3 卵巢移植 B6雌鼠(8～10周齡)與D2雄鼠(10周齡)4∶1合籠培育F1代，次日查到陰栓者記為E0.5 d;以20 d為孕期，預產期前3 d每日早晚查看孕鼠是否生產;斷頸處死新生12 h以內F1小鼠，取出雙側卵巢待移植。異戊巴比妥(15 mg/mL)麻醉成年(8～10周)F1雌鼠(移植受體)。消毒小鼠背部，在肋脊角區做縱向切口進入腹腔，切除雙側卵巢，然後在左側腎被膜下植入新生小鼠卵巢2枚，層層縫合傷口。待受體鼠清醒後送回鼠舍。
1.4 卵泡分離 新生小鼠卵巢移植14 d後，將受體鼠斷頸處死，從腎被膜下取出移植的卵巢，卵巢移植物約2 mm大小，表面可見豐富的重構血管，在體視鏡下可清晰觀察到卵巢移植物中的卵泡。用1 mL注射器(320310，美國BD公司)的針尖將每枚卵巢均勻橫切為2塊，4塊卵巢組織混合後隨機分組進行分離。
1.4.1 A組(單純機械法) 將卵巢組織塊轉移至卵泡分離操作液(α?MEM?HEPES，10%FCS，100 IU/mL penicillin，100 mg/mL streptomycin，不含膠原酶和DNA酶)中，在帶有37 ℃恆溫熱盤(MATS?U55SZX2A，奧林巴斯)的體視顯微鏡下，用精細尖鑷 (直5#，T1?181，中國淮安特申醫療器械有限公司)剝離卵巢中的卵泡。每隔5 min，即將已剝離的完整卵泡轉移至事先裝有1 mL卵泡培養液(α?MEM，5%FCS，0.1 IU/mL FSH，0.01 IU/mL LH，1%ITS)的35 mm培養皿中。共分離4次，總時間約20 min。
1.4.2 B組(長時酶解法) 將卵巢組織塊用1 mL注射器針尖均切為3小塊，置於500 μL卵泡酶解液(α?MEM?HEPES，3 mg/mL膠原酶I，1 mg/mL DNase I)中，在37 ℃、體積分數為0.05的CO2培養箱中消化20 min，第20分鍾時將其從培養箱取出，用200 μL移液槍吹吸消化液30次。在體視顯微鏡下將游離出的結構完整的卵泡轉移至事先裝有1 mL卵泡培養液的35 mm培養皿中。
1.4.3 C組(短時酶解法) 將卵巢組織塊用1 mL注射器針尖均切為3塊，置於500 μL卵泡酶解液中，在37 ℃、體積分數為0.05的CO2培養箱中消化，每隔5 min即從培養箱中將組織取出，用200 μL移液槍吹吸消化液30次，在體視顯微鏡下觀察是否有游離的卵泡，如有則將卵泡迅速轉移至裝有1 mL新鮮培養液的35 mm培養皿中。共消化20 min。
1.4.4 D組(結合法) 將卵巢組織塊用1 mL注射器針尖均切成3塊，轉移至500 μL卵泡酶解液中，在37 ℃、體積分數為0.05的CO2培養箱中消化5 min。然後在帶有37 ℃恆溫熱盤的體視顯微鏡下，在卵泡酶解液中用精細尖鑷分離卵泡。每分離5 min，即將已分離得到的完整的卵泡轉移至事先裝有1 mL卵泡培養液的35 mm培養皿中。共分離4次，20 min。
1.5 雙熒光染色 每組隨機選取部分分離卵泡，放入Calcein AM(4 mmol/L，Sigma，C1359)和Ethidium Homodimer?I(10 mmol/L，Sigma，E1903)混合液中，37 ℃、體積分數為0.05的CO2培養箱中培養45 min;卵泡懸液置倒置熒光顯微鏡觀察，在藍光的激發下，活的卵泡發綠色熒光，死的卵泡發紅色熒光，分別計數死、活卵泡數。
1.6 卵泡體外培養 各組分離所得卵泡分別進行體外培養12 d。第0天，分離得到的卵泡培養在加有1 mL培養液的35 mm培養皿中;第1天，加入1 mL新鮮培養液;此後每天半量換液;第12天全量換為卵泡成熟培養液(α?MEM，5%FCS，0.1 IU/mL FSH，0.01 IU/mL LH，1% ITS，1.5 IU/mL hCG);第13天，在加入卵泡成熟培養液後26 h收集排出的卵丘復合體(OGCs)。
1.7 體外受精 每組的OGCs分別行體外受精。卵母細胞受精培養4 h後從受精滴中洗出，轉移至預先平衡過的KSOM+AA的小液滴中培養。觀察卵母細胞的成熟率(以含有第一極體的卵母細胞百分率代表)、受精率(以雙原核卵母細胞佔有第一極體卵母細胞的百分率代表)。
1.8 統計學處理 採用SPSS 11.5軟分析。4組的卵泡存活率、培養卵泡各階段成熟率、排卵率運用單因素方差分析(one way ANOVA)，各組均數以最小顯著差法(least significant difference, LSD)進行兩兩比較和顯著性檢驗;卵母細胞成熟率和受精率採用χ2 檢驗。 2.1 分離卵泡回收量 經過分離操作後，顯微鏡下可見大量腔前卵泡，大部分卵泡呈圓或橢圓形，邊界清楚，部分卵泡外周附有或多或少的卵巢間質組織，卵母細胞成圓形，位於卵泡中央，透明帶清晰可見(圖1A)。體視鏡下回收卵泡邊界清晰、光滑的卵泡，計數各組回收卵泡量(表1)。表1 各組卵泡回收量比較
2.2 雙熒光染色結果 卵泡雙熒光染色後，在藍光的激發下，活細胞顯示綠色熒光，死亡細胞則呈紅色熒光。將卵母細胞呈綠色、卵泡細胞≥70%呈綠色者視為存活卵泡(圖1B)。各組活卵泡的百分率見表2。表2 各組卵泡存活率比較
2.3 卵泡體外培養結果 每組卵泡在相同條件下培養12 d，計數5、12 d的卵泡殘存率;在加入hCG 26 h後，計數排卵率。各組各項指標的結果見表3。表3 各組卵泡體外培養結果比較
2.4 體外受精結果 各組收獲OGCs分別受精，獲能精子密度控制在5×105 mL?1。早期胚置於KSOM+AA中培養，卵的密度為每20 μL含 15個。成熟率及受精率的計數結果見表4。D組成熟率高於其他3組，餘3組之間差別無統計學意義;受精率4個組之間無差別。表4 各組體外成熟與受精結果比較 近年來，多種哺乳動物，如小鼠、兔、豬及人的卵泡誘導發育技術體系都獲得了很大進展[4?7]。在這些體系中，大多傾向於將卵巢中的卵泡單獨分離出來後再進行培養。有報道表明，分離卵泡只有其基底膜未受損傷並帶有少量間質細胞、未成熟圓形卵母細胞位於其中央時，體外培養才能成功[8]。迄今常用的卵泡分離方法有兩種，包括利用水解酶(如鏈霉蛋白酶、膠原蛋白酶和脫氧核糖核酸酶)消化卵巢的結締組織而獲得游離卵泡的酶解法和用銳利器械剝離出卵泡的機械法[6,9?10]。就目前的資料來看，兩種方法各有優缺點。酶解法是細胞生物學研究中分離各種組織、器官中細胞的常用方法，因其操作簡便有效而受到普遍應用。酶解法分離卵泡時，普遍採用膠原蛋白酶和脫氧核糖核酸酶組合配製成分離液。這種分離液利用酶消化卵巢間質組織中的膠原蛋白，使卵泡從卵巢組織釋放出來，故在限定時間里可望收獲較多的游離卵泡。有報道表明，用酶解法分離卵泡培養的卵母細胞可有更高成熟率和卵裂率的趨勢[11]。但是，分離液長時間浸泡卵巢組織時，顯然可能導致卵泡基底膜受到損傷，從而使卵泡在後續培養中更易於退化，降低了卵泡培養的殘存率，因此酶的作用濃度和時間是個關鍵的問題。
用機械法分離卵泡，如果操作手法得當，可能保持卵泡基底膜的完整，從而在體外培養過程中更容易維持卵泡的立體結構，保障更高的培養殘存率。Carrell等和Park等的結果顯示，用機械法分離的卵泡，其殘存率存活率顯著高於用酶解法分離者[12?13];Shen等還進一步利用機械法來源的小鼠卵泡培育成熟卵母細胞並成功制備了IVF?ET小鼠[4]。但是，也有報道表明，移植後卵巢切片顯示有些腔前卵泡的卵母細胞與其周圍顆粒細胞的聯系很薄弱[14]。用機械法從緻密的卵巢間質組織中分離卵泡時，往往難於避免牽拉卵泡的力量過大，很容易破壞卵母細胞與顆粒細胞的連接，而卵母細胞和顆粒細胞的縫隙連接異常，會影響卵母細胞的發育並導致減數分裂阻斷[15?16]。故機械法能否保障卵泡存活率在很大程度上依賴於操作技巧，同時在有限的分離操作時間里很難提高卵泡的回收量。從目前的報道來看，單用機械法從每枚卵巢中得到的卵泡數量非常有限，平均每個卵巢只有12.51和11.27個[4,14]。
本研究結果表明，酶解法的卵泡回收量、分離後卵泡培養的殘存率、排卵率均低於機械法(表1，3)，但分離剛結束時的卵泡活率卻高於機械法(表2)。此結果與Demeestere等的報道不符，卻與Carrell等和Park等的報道相似[11?13]。說明酶解法在分離卵泡時對卵泡造成的直接損傷較少，但對卵泡的遠期存活不利。值得注意的是，本研究採用酶解法分離卵泡時，設置了C組即短時酶解法，採用酶解過程中每隔5 min收獲1次卵泡的改變法，而該組的排卵率顯著高於常規的20 min酶解處理組，證明減少酶的作用時間是有價值的。
為了提高分離卵泡的回收量，同時又保障較高的培養殘存率、排卵率和卵泡的生殖潛能，本研究建立了將酶解法和機械法相結合來分離新生小鼠卵巢移植物中腔前卵泡的技術方案。在結合法(D組)中，將卵巢組織塊先在含有膠原蛋白酶和脫氧核糖核酸酶的分離液中37 ℃消化5 min，隨即採用與單純機械法相同的操作手法進行剝離，同時將剝離出的卵泡立即轉移至不含酶的培養液中。此做法利用酶的消化作用使卵泡周圍的結締組織得到一定消化，卵巢組織變得比較鬆散，從而減少機械剝離時對卵泡的牽拉損傷，同時又使游離出的卵泡及時離開分離液，減少了水解酶對卵泡的作用時間，比單純酶解法或單純機械法更有利於保持卵泡的三維結構。實驗結果表明，D組中分離後卵泡的存活率與單純酶解法(B、C組)無差別，但高於單純機械法(A組)，而每塊卵巢的卵泡回收量、平均排卵數、卵母細胞成熟率多項指標均高於其他各組，說明結合法具有絕對優於兩法單用的趨勢。同時，採用結合法從每個卵巢移植塊獲得97.13個卵泡(相當於194卵泡/卵巢)其中40.66%達到排卵，顯著高於國內外文獻所報道的相應數據。值得注意的是，本研究用來源於4種分離方法所培育的卵母細胞進行體外受精，其受精率在各組間並無顯著差異，說明分離技術只對卵泡在後續培養中的發育與成熟有影響，而對那些發育至成熟的卵母細胞的生殖潛能並無顯著影響。
實驗結果提示，本研究建立的酶解?機械結合法是一個良好的卵泡分離技術，對卵巢組織工程的技術進步具有實際應用價值。
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『柒』 孕婦可以打這種針水嗎

孕婦多注意不要流產就好 保胎我感覺好像不用營養更得上才最重要 怎麼說也是二個人吃